小鼠心肌細(xì)胞的凍存方法和常見問題解決辦法介紹

　　小鼠心肌細(xì)胞已廣泛用于成熟心肌細(xì)胞離子通道、蛋白免疫化學(xué)、心肌病及心肌梗塞等模型的實(shí)驗(yàn)研究中，不僅在結(jié)構(gòu)和功能上更接近在體細(xì)胞，并且成熟心肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型可以排除成纖維細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。

　　心臟由心肌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞組成，心肌細(xì)胞占心臟總體積的75%，但細(xì)胞數(shù)僅占心臟細(xì)胞總數(shù)的1/3，出生后心肌細(xì)胞喪失增值能力，是高度分化的終末細(xì)胞，主司收縮功能。間質(zhì)細(xì)胞由成纖維細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等組成，成纖維細(xì)胞占間質(zhì)細(xì)胞90%以上，成纖維細(xì)胞具有分泌功能，合成和分泌生物活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)自身膠原的產(chǎn)生及周圍心肌細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能。

　　心肌細(xì)胞按生理功能分為兩類：一類為工作細(xì)胞，包括心房肌及心室肌，胞漿內(nèi)含有大量肌原纖維，因而具有收縮功能，主要起機(jī)械收縮作用。除此以外，還具有興奮性、傳導(dǎo)性而無自律性。另一類為特殊分化的心肌細(xì)胞，包括分布在竇房結(jié)、房間束與結(jié)間束、房室交界、房室束和普肯耶纖維中的一些特殊分化的心肌細(xì)胞，胞漿中沒有或很少有肌原纖維，因而無收縮功能，主要具有自律性，有自動(dòng)產(chǎn)生節(jié)律的能力，同時(shí)具有興奮性、傳導(dǎo)性。

　　一、小鼠心肌細(xì)胞凍存方法

　　1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；

　　2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；

　　3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜；

　　二、常見問題及解決方案

　　1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)解決。

　　2、細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。